Fra1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400527-ACT

FOSL1 codifica a subunidade Fra1 do fator de transcrição AP-1, uma proteína com zíper de leucina que forma heterodímeros com membros da família JUN para regular a expressão gênica responsiva a estímulos. A atividade de Fra1 atua a jusante da sinalização MAPK/ERK e integra sinais de vias de fatores de crescimento, citocinas e estresse para controlar programas ligados à proliferação, diferenciação, remodelamento da matriz extracelular e transição epitélio–mesênquima. A expressão desregulada de FOSL1 foi relatada em múltiplos contextos tumorais e estados inflamatórios, nos quais pode remodelar redes transcricionais que governam invasão, plasticidade de linhagem e interações com o microambiente. Como regulador nuclear, Fra1 é um nó útil para dissecar o uso de enhancers dependentes de AP-1 e circuitos transcricionais específicos de contexto em células humanas.

Fra1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOSL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fra1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOSL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOSL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fra1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOSL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fra1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fra1 em células tumorais com expressão de FOSL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.