Partículas Lentivirales de Activación (m) FOXI1: sc-420369-LAC

Foxi1 codifica el factor de transcripción de tipo forkhead box FOXI1, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que controla programas de linaje epitelial y la diferenciación. En el ratón, FOXI1 es esencial para el transporte iónico y la homeostasis ácido-base al dirigir redes transcripcionales en células epiteliales especializadas, incluidas las implicadas en la fisiología renal y del oído interno. La regulación asociada a FOXI1 se integra con circuitos transcripcionales del desarrollo y con procesos de maduración epitelial que determinan el patrón tisular y la especialización funcional. La actividad desregulada de FOXI1 se asocia con defectos del desarrollo epitelial y fenotipos de alteración del manejo iónico, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar redes de regulación génica subyacentes a la organogénesis y a los desequilibrios homeostáticos.

Las partículas de activación lentiviral FOXI1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Foxi1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FOXI1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Foxi1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FOXI1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Foxi1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.