FOXC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403113-ACT

FOXC1 (forkhead box C1) é um fator de transcrição do tipo hélice-alada que regula programas gênicos que controlam a padronização embrionária, o desenvolvimento da crista neural e do mesênquima periocular, bem como a especificação vascular e linfática. Atua como um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que integra entradas de sinalização do desenvolvimento, incluindo redes transcricionais associadas a TGF-β/BMP e Wnt, para influenciar decisões de destino celular, migração e remodelamento da matriz extracelular. A expressão desregulada ou mutações em FOXC1 estão fortemente associadas a distúrbios de disgenesia do segmento anterior, como o espectro de Axenfeld–Rieger e o glaucoma congênito, e a atividade aberrante de FOXC1 tem sido relacionada a diferenciação alterada e fenótipos invasivos em múltiplos contextos de câncer. Como regulador transcricional nodal, FOXC1 é amplamente utilizado para estudar comprometimento de linhagem, programas do tipo transição epitélio–mesênquima e circuitos de regulação gênica em modelos de desenvolvimento e doença.

FOXC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXC1 em células tumorais com expressão de FOXC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.