Plásmido CRISPR de Activación (h) follistatin: sc-401687-ACT

El gen FST humano codifica la folistatina, una glucoproteína secretada que se une y neutraliza ligandos de la superfamilia TGF-β, en particular las activinas y varias BMP, ajustando así los programas transcripcionales dependientes de SMAD2/3 y de SMAD1/5/8. Al modular la disponibilidad de ligandos, la folistatina influye en el crecimiento celular, la diferenciación, la remodelación tisular y la comunicación cruzada inflamatoria en diversos contextos, como el músculo esquelético, los tejidos reproductivos y el microambiente tumoral. La desregulación de la expresión de FST se ha asociado con alteraciones de la miogénesis y de la señalización relacionada con la fibrosis, perturbaciones del eje reproductivo y fenotipos relevantes para el cáncer vinculados a desequilibrios en las vías de activina/BMP. Como regulador clave de la vía, la folistatina se utiliza con frecuencia para investigar la dinámica de la red de TGF-β y los efectos de la señalización paracrina en modelos celulares diseñados.

follistatin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FST sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

follistatin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FST en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FST, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de follistatin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FST y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de follistatin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía follistatin en células tumorales con expresión de FST silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.