FMO3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406605

概要

FMO3は、フラビン含有モノオキシゲナーゼ3（flavin-containing monooxygenase 3）をコードしており、ヒト肝臓で高い活性を示すミクロソーム局在のNADPH依存性モノオキシゲナーゼである。多様な外来異物（キセノバイオティクス）および内因性アミンに対して、N-酸素化およびS-酸素化を触媒する。FMO3はトリメチルアミン（TMA）をトリメチルアミンN-オキシド（TMAO）へ変換することで、食事由来栄養素の代謝を肝臓のレドックス生化学および全身の代謝物プロファイルと結び付ける。FMO3活性は解毒能に寄与し、より広範な第I相／第II相の生体内変換ネットワークとの相互作用を通じて、代謝物介在性シグナル伝達にも影響を与える。FMO3の遺伝的変化または機能的撹乱は、トリメチルアミン尿症を含むアミン酸化の変化と関連しており、薬物代謝の個人差や代謝形質の調節との関係でしばしば研究されている。

FMO3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFMO3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FMO3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FMO3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FMO3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FMO3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FMO3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FMO3の機能に不可欠なFMO3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FMO3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FMO3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFMO3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FMO3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FMO3 HDRプラスミド（h）および FMO3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFMO3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFMO3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。