FLAD1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406725

Descripción general

FLAD1 codifica la sintasa 1 de dinucleótido de flavina y adenina (FAD), una enzima bifuncional que cataliza la adenilación de FMN para generar FAD, un cofactor redox clave requerido por numerosas flavoproteínas mitocondriales y citosólicas. Al controlar la disponibilidad celular de FAD, FLAD1 sostiene el metabolismo oxidativo, las reacciones de transferencia de electrones, la β-oxidación de ácidos grasos y, de forma más amplia, la homeostasis mitocondrial, conectando el metabolismo de la riboflavina derivada de micronutrientes con la producción de energía y el equilibrio redox. La alteración de la síntesis de FAD puede desorganizar vías dependientes de flavoproteínas, modificar el manejo de especies reactivas de oxígeno y comprometer la capacidad bioenergética. La evidencia genética y funcional en humanos vincula la disfunción de FLAD1 con errores congénitos del metabolismo de las flavinas y fenotipos de enfermedad mitocondrial, lo que la hace relevante para estudios de estrés metabólico y biología mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FLAD1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FLAD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FLAD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FLAD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FLAD1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FLAD1 para la investigación de la señalización de FLAD1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FLAD1 críticos para la función de FLAD1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FLAD1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FLAD1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FLAD1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FLAD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FLAD1 (h) y el plásmido HDR FLAD1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FLAD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FLAD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.