FKHR/FOXO1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425179-ACT

O gene Foxo1 de camundongo codifica o fator de transcrição da família forkhead box FKHR/FOXO1, um efetor central da sinalização insulina/IGF-1–PI3K–AKT que coordena programas transcricionais que controlam a gliconeogênese, respostas ao estresse oxidativo, parada do ciclo celular, apoptose e a homeostase de células imunes. A fosforilação dependente de AKT regula o transporte nucleocitoplasmático e a atividade transcricional de FOXO1, integrando o estado nutricional às vias metabólicas e de sobrevivência celular. Estudos in vivo e em células associam alterações na atividade de Foxo1 à disfunção metabólica, à diferenciação aberrante de linfócitos e a fenótipos de resistência ao estresse, tornando-o um alvo amplamente utilizado para investigar a comunicação cruzada entre vias. Foxo1 também se conecta à sinalização de TGF-β, mTOR e processos inflamatórios, sustentando pesquisas sobre redes transcricionais que moldam o desenvolvimento tecidual e estados celulares relevantes para doenças.

FKHR/FOXO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Foxo1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FKHR/FOXO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Foxo1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Foxo1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FKHR/FOXO1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Foxo1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FKHR/FOXO1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FKHR/FOXO1 em células tumorais com expressão de Foxo1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.