FGF-21 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401193-ACT

O FGF21 humano codifica o fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF-21), um membro da família FGF com ação semelhante à endócrina, que regula o equilíbrio energético sistêmico e as respostas ao estresse nutricional. A sinalização do FGF-21 integra programas metabólicos de hepatócitos, adipócitos e músculo, influenciando a homeostase da glicose e dos lipídios por meio de vias mediadas por FGFR que requerem o correceptor β-Klotho, com modulação a jusante de MAPK/ERK e de redes transcricionais relacionadas. Ele é fortemente induzido pelo jejum, por estados cetogênicos e por estresse celular, coordenando respostas adaptativas como a oxidação de ácidos graxos, a cetogênese e a sensibilidade à insulina. A expressão desregulada de FGF21 tem sido associada a distúrbios metabólicos, incluindo obesidade, diabetes tipo 2, doença hepática gordurosa não alcoólica e fenótipos mais amplos de risco cardiometabólico, tornando-o um alvo útil para investigação de vias.

FGF-21 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-21 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-21. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-21 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-21 em células tumorais com expressão de FGF21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.