FGF-19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401725
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- FGF-19 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im FGF-19-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FGF-19: sc-390621
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FGF-19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401725 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
FGF19 kodiert den Fibroblasten-Wachstumsfaktor 19 (FGF-19), einen endokrinen FGF, der vor allem über FGFR4 in Verbindung mit dem Korezeptor β-Klotho signalisiert und so die metabolische Homöostase reguliert. In Hepatozyten und Enterozyten ist FGF-19 an der Rückkopplungskontrolle des Gallensäurestoffwechsels beteiligt, indem es CYP7A1 unterdrückt und mit FXR-gesteuerten Transkriptionsprogrammen zusammenwirkt, die den Lipid- und Glukosestoffwechsel beeinflussen. Nachgeschaltete Signale aktivieren MAPK/ERK und verwandte Kinasekaskaden und verknüpfen FGF-19 damit mit Zellwachstum, Differenzierung und gewebespezifischer metabolischer Anpassung. Eine fehlregulierte FGF19-Expression oder -Signalgebung wird mit verändertem Gallensäuremetabolismus und Phänotypen metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht; zudem wird FGF-19 im Kontext aberranter Wachstumssignalwege in der Krebsbiologie häufig untersucht.
Das FGF-19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FGF19-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FGF19-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FGF19 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FGF-19-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FGF19-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FGF-19-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf FGF19-Exone abzielen, die für die FGF-19-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere FGF19-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom FGF-19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FGF-19 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FGF19-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FGF-19 HDR-Plasmid (h) und FGF-19 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FGF19-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FGF19-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.