FGF-19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401725

概要

FGF19は、内分泌性FGFである線維芽細胞増殖因子19（FGF-19）をコードしており、主に共受容体であるβ-Klothoと協調してFGFR4を介し、代謝恒常性の調節に関与します。肝細胞および腸上皮細胞（エンテロサイト）では、FGF-19はCYP7A1を抑制することで胆汁酸のフィードバック制御に関わり、脂質および糖代謝に影響するFXR駆動性の転写プログラムとも統合されます。下流シグナル伝達ではMAPK/ERKをはじめとする関連キナーゼカスケードが活性化され、FGF-19は細胞増殖、分化、ならびに組織特異的な代謝適応と結び付けられています。FGF19の発現やシグナル伝達の異常は、胆汁酸代謝の変調や代謝疾患様の表現型と関連づけられており、がん生物学における異常増殖シグナルの文脈でも頻繁に研究されています。

FGF-19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFGF19遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FGF19内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FGF19のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FGF-19タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FGF-19シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FGF19欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FGF-19の機能に不可欠なFGF19エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FGF19ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FGF-19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFGF-19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FGF19遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FGF-19 HDRプラスミド（h）および FGF-19 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFGF19ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFGF19標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。