FEN-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403168

Panoramica

FEN1 codifica per la flap endonucleasi 1 (FEN-1), una nucleasi struttura-specifica che taglia gli intermedi “flap” 5′ durante la maturazione dei frammenti di Okazaki e la riparazione per escissione di basi a patch lungo (long-patch BER). FEN-1 coopera con PCNA e con le DNA polimerasi per sostenere la fedeltà della replicazione del DNA, la gestione delle forcelle replicative bloccate e la risoluzione di strutture secondarie del DNA che possono innescare instabilità genomica. Attraverso i suoi ruoli nelle risposte allo stress replicativo, nella scelta delle vie di riparazione e nel mantenimento dell’integrità cromosomica, un’alterazione della funzione di FEN1 è collegata all’accumulo di mutazioni e a firme molecolari associate alla biologia del cancro e alla sensibilità al danno al DNA. FEN-1 è quindi ampiamente utilizzata come punto di accesso meccanicistico per studiare le reti di riparazione del DNA, i processi accoppiati alla replicazione e la segnalazione dei checkpoint.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FEN-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FEN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FEN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FEN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FEN-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FEN1 per lo studio della segnalazione di FEN-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FEN1 critici per la funzione di FEN-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FEN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FEN-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FEN-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FEN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FEN-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FEN-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FEN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FEN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.