Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Fe65 Double Nickase Plasmid (h): sc-403226-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Fe65 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Fe65 Double-Nickase-Plasmid (h) und Fe65 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APBB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Fe65: sc-398389
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Fe65 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fe65 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APBB1 kodiert Fe65, ein Adapterprotein, das über seine Phosphotyrosin-Bindungsdomänen an den zytoplasmatischen C‑Terminus des Amyloid-Vorläuferproteins (APP) bindet und Multiproteinkomplexe koordiniert, die an der neuronalen Signalübertragung beteiligt sind. Fe65 wirkt an endozytotischem Transport, synaptischer Funktion und der Regulation der Genexpression mit, und zwar über Interaktionen mit der APP-Prozessierungsmaschinerie und nukleären Ko‑Regulatoren. Diese Aktivitäten verknüpfen APBB1 mit Signalwegen, die die APP-Spaltung, intrazelluläre Signalübertragung und aktivitätsabhängige Transkription steuern. Veränderte Fe65–APP‑Interaktionen und nachgeschaltete Signalwege wurden im Kontext von Neurodegeneration und amyloidogener Prozessierung untersucht, was seine Relevanz in mechanistischen Modellen der Alzheimer‑Krankheit und verwandter Neuropathologien unterstreicht.
Fe65 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APBB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APBB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APBB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APBB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.