FBXO25 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405092-ACT

ヒトFBXO25はF-boxタンパク質をコードしており、SCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体の基質認識コンポーネントとして機能し、特定のタンパク質をユビキチン化およびプロテアソーム依存的分解へと導くのに寄与します。制御されたタンパク質分解を通じて、FBXO25は細胞周期進行、ストレス応答性シグナル伝達、ならびにプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持の制御に関与します。SCF介在性のユビキチンシグナル伝達が攪乱されると、転写プログラムや細胞の恒常性が再編され得るため、F-box活性の変化は、がん生物学や神経生物学における疾患関連表現型と結び付けられます。したがってFBXO25は、ユビキチン–プロテアソーム経路の配線や、それに続くシグナル伝達および遺伝子発現への影響を解明する上で注目される標的です。

FBXO25 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXO25の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBXO25 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FBXO25 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXO25転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBXO25の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXO25遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBXO25依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXO25発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBXO25経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。