FBL8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406696

Panoramica

FBXL8 (FBL8) codifica una proteina F-box che si prevede funzioni come componente di riconoscimento del substrato nei complessi di ubiquitina ligasi E3 di tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), sostenendo il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso l’ubiquitinazione selettiva di proteine bersaglio, FBXL8 è in grado di influenzare i programmi di proteostasi che modulano la progressione del ciclo cellulare, la trasduzione del segnale e le risposte allo stress. L’alterazione dell’attività delle ubiquitina ligasi mediate da proteine F-box può modificare il controllo dei checkpoint e le dinamiche di vie di segnalazione associate alla trasformazione oncogena e ad altri disturbi proliferativi. FBXL8 rappresenta quindi un nodo utile per indagare come la degradazione mirata si integri con l’omeostasi cellulare e con reti di segnalazione legate alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBXL8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBXL8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBXL8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FBL8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBXL8 per lo studio della segnalazione di FBL8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBXL8 critici per la funzione di FBL8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBXL8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FBL8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FBL8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBXL8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FBL8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FBL8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBXL8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBXL8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.