Fatty Acid Synthase Double Nickaseプラスミド (h): sc-400440-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Fatty Acid Synthase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Fatty Acid Synthaseダブルニカースプラスミド（h）およびFatty Acid Synthaseダブルニカースプラスミド（h2）は、FASNを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Fatty Acid Synthase 抗体 (G-11): sc-48357
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Fatty Acid Synthase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400440-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fatty Acid Synthase Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400440-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトFASNは脂肪酸合成酵素（fatty acid synthase）をコードしており、NADPHを用いてアセチルCoAとマロニルCoAからde novoでパルミチン酸を合成する、多機能な細胞質酵素複合体である。FASN活性は、膜生合成のための脂肪酸供給、タンパク質のパルミトイル化、脂質を介したシグナル伝達を支えることで脂質恒常性に寄与し、栄養状態を同化的な増殖プログラムへと結び付ける。さらに、クエン酸–リンゴ酸–ピルビン酸シャトル、NADPH産生、SREBP駆動性の脂質新生（リポジェネシス）転写ネットワークなどの中枢代謝経路と連携し、インスリンおよびmTORシグナルに応答する。FASN依存的な脂質新生の破綻は、代謝性疾患、肥満に伴う炎症、肝脂肪化、ならびに脂質フラックスの変化が細胞ストレス応答やレドックスバランスを再構築し得る増殖性状態において、広く研究されている。
Fatty Acid Synthase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FASN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FASN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FASNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FASNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。