Partículas Lentivirales de Activación (m) FAT10: sc-423986-LAC

Mouse Ubd codifica FAT10 (ubiquitina D), un modificador tipo ubiquitina que se conjuga covalentemente a proteínas diana para promover su rápida degradación por el proteasoma 26S. La FAT10ilación funciona en gran medida de forma independiente de las cadenas canónicas de ubiquitina y se ha vinculado a la señalización inflamatoria, a programas sensibles al interferón y al procesamiento de antígenos a través de las vías del MHC de clase I. La expresión de Ubd/FAT10 es inducible por citocinas proinflamatorias y puede remodelar la proteostasis, la regulación del ciclo celular y las respuestas adaptativas al estrés mediante cambios en la estabilidad proteica. La desregulación de FAT10 se ha asociado con estados inflamatorios y fenotipos relevantes para el cáncer en modelos experimentales, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el crosstalk inmunometabólico y la regulación dependiente del proteasoma.

Las partículas de activación lentiviral FAT10 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ubd en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FAT10 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ubd, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FAT10. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ubd y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.