FAM21C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404093

Visão geral

WASHC2C codifica a FAM21C, um componente do complexo WASH que regula a polimerização de actina dependente de Arp2/3 em endossomos, sustentando a triagem de cargas mediada pelo retrômero e a tubulação endossomal. Por meio de interações com nexinas de triagem e subunidades do retrômero, a FAM21C contribui para a reciclagem de proteínas de membrana e para a manutenção da homeostase endolisossomal. A disfunção da via WASH pode perturbar o tráfego de receptores, a reciclagem de transportadores de nutrientes e as saídas de sinalização acopladas à dinâmica endossomal. Alterações no tráfego endossomal e na regulação do citoesqueleto estão implicadas na biologia do câncer e em mecanismos neurodegenerativos, tornando a FAM21C relevante para estudos de organização celular e respostas ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FAM21C (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene WASHC2C em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do WASHC2C, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do WASHC2C na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FAM21C.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de WASHC2C para a investigação da sinalização de FAM21C, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) WASHC2C críticos para a função FAM21C
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos WASHC2C para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FAM21C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo FAM21C Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus WASHC2C. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FAM21C Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR FAM21C (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia WASHC2C para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo WASHC2C definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.