FAM21C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404093

概要

WASHC2Cは、エンドソーム上でArp2/3依存的なアクチン重合を制御し、レトロマー介在性のカーゴ選別およびエンドソームのチューブ形成を支えるWASH複合体の構成因子であるFAM21Cをコードします。ソーティングネキシンやレトロマーサブユニットとの相互作用を介して、FAM21Cは膜タンパク質のリサイクリングと、エンドソーム／リソソーム系の恒常性維持に寄与します。WASH経路の機能が破綻すると、受容体輸送、栄養トランスポーターの再利用、ならびにエンドソーム動態に結び付いたシグナル出力が乱れる可能性があります。エンドソーム輸送の異常と細胞骨格制御の破綻は、がん生物学や神経変性の機序にも関与するとされており、FAM21Cは細胞内構造の制御やストレス応答を研究する上で重要な対象となります。

FAM21C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWASHC2C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WASHC2C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WASHC2Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FAM21Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FAM21Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WASHC2C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FAM21Cの機能に不可欠なWASHC2Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WASHC2Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FAM21C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFAM21C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WASHC2C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FAM21C HDRプラスミド（h）および FAM21C HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWASHC2Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWASHC2C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。