FAM123A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404231

Panoramica

AMER2 (FAM123A) è una proteina citoplasmatica coinvolta nella regolazione della segnalazione Wnt/β-catenina e dei processi associati alla polarità cellulare, collegando segnali prossimali alla membrana a programmi trascrizionali a valle che influenzano proliferazione e differenziamento. Modulando componenti della rete regolatoria della β-catenina, FAM123A può influire sull’adesione e sull’organizzazione del citoscheletro, con un potenziale impatto sull’architettura dei tessuti epiteliali. Un’alterata attività della via Wnt è ampiamente rilevante per la biologia dello sviluppo e la trasformazione oncogena, rendendo AMER2 un punto di partenza utile per analizzare le dipendenze dallo stato di segnalazione. La ricerca su AMER2/FAM123A supporta studi meccanicistici sul crosstalk tra vie di segnalazione, sugli output trascrizionali specifici del contesto e sulle relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM123A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AMER2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AMER2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AMER2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAM123A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AMER2 per lo studio della segnalazione di FAM123A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AMER2 critici per la funzione di FAM123A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AMER2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAM123A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FAM123A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AMER2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAM123A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FAM123A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AMER2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AMER2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.