FADS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404735-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FADS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FADS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FADS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FADS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FADS1: sc-134337
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FADS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FADS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FADS1 kodiert die Fettsäure-Desaturase 1, eine Δ5-Desaturase, die einen zentralen geschwindigkeitsbestimmenden Schritt in der Biosynthese langkettiger mehrfach ungesättigter Fettsäuren katalysiert, indem sie Dihomo-γ-Linolensäure in Arachidonsäure umwandelt und verwandte Substrate in nachgelagerte Eicosanoid-Vorstufen überführt. Über die Regulation der Membranlipidzusammensetzung und der Verfügbarkeit von Lipidmediatoren beeinflusst FADS1 entzündliche Signalwege, die metabolische Homöostase sowie zelluläre Signalprozesse, die mit dem Umbau von Phospholipiden und dem Arachidonsäurestoffwechsel verknüpft sind. Genetische Variation und veränderte Expression von FADS1 wurden mit Verschiebungen in zirkulierenden Lipidprofilen und mit einer erhöhten Anfälligkeit für komplexe Merkmale mit kardiometabolischen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was FADS1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien lipidgetriebener zellulärer Programme macht. In humanen Zellmodellen ermöglicht die gezielte Störung von FADS1 die Untersuchung des metabolischen Flusses, der Membrandynamik und lipidmediatorabhängiger transkriptioneller Antworten.
FADS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FADS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FADS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FADS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FADS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.