EYA4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404355-NIC

EYA4は、核―細胞質間シグナル伝達に関与する転写共活性化因子およびハロ酸デハロゲナーゼ様ホスファターゼからなるEyes Absent（EYA）ファミリーの一員をコードします。EYA4は、タンパク質チロシンホスファターゼ活性を、転写因子活性やクロマチン関連複合体を調節する相互作用と結び付けることで、発生過程における遺伝子制御プログラムに関与します。ヒトの生物学では、EYA4は感覚系および心臓の表現型と関連付けられており、遺伝的変異が常染色体優性の難聴と関連するほか、心筋症に関わるプロセスとの関連も報告されています。細胞運命の決定やストレス応答性転写における役割から、EYA4は分化や疾患関連の細胞モデルにおける制御ネットワークを解析するための有用な標的となります。

EYA4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EYA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EYA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EYA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EYA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。