EXOSC10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404272-NIC

EXOSC10は、進化的に保存されたRNAエキソソームの触媒サブユニットをコードしており、核内および細胞質の両区画でRNAの監視とプロセシングに寄与する3′→5′エキソリボヌクレアーゼとして機能します。rRNA、snoRNA、snRNA、mRNAの成熟と分解（ターンオーバー）に関与し、異常または不適切にプロセシングされたRNAを分解することでトランスクリプトームの完全性を維持します。これらの役割を通じて、EXOSC10はリボソーム生合成、核小体の恒常性、ならびに細胞周期の進行や細胞ストレス応答と交差するRNA品質管理経路に影響を与えます。EXOSC10を含むRNAエキソソーム構成因子の機能不全は、複数の疾患状況で観察されるRNA代謝の変化と関連づけられており、RNAプロセシング異常の機序解明研究における重要な標的となっています。

EXOSC10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EXOSC10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EXOSC10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EXOSC10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EXOSC10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。