EXOSC10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404272-ACT

ヒトEXOSC10は、RNAエクソソームの中核構成要素として機能する触媒活性をもつ3′→5′エキソリボヌクレアーゼをコードしており、核および細胞質にわたるRNAの監視とプロセシングを支えています。EXOSC10は、rRNA、sn/snoRNA、不安定な転写産物や異常転写産物など多様なRNAクラスの成熟と分解（ターンオーバー）に寄与し、その結果としてリボソーム生合成、RNA品質管理、遺伝子発現の恒常性に影響を与えます。これらの作用を通じて、EXOSC10は核小体機能、RNA代謝、細胞ストレス応答に関連する経路と交差します。エクソソーム関連のRNAプロセシングの破綻は、全ゲノム規模のトランスクリプトーム不均衡や疾患に関連する表現型と結び付けられており、そのためEXOSC10はRNA分解の機構研究や、プロテオスタシスに隣接する制御の解明に有用な研究ノードとなります。

EXOSC10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EXOSC10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EXOSC10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EXOSC10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEXOSC10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EXOSC10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEXOSC10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEXOSC10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEXOSC10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEXOSC10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。