Espin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403106

概要

ESPNは、平行に並んだアクチンフィラメント束に局在し、微絨毛やステレオシリアに豊富に存在するアクチン束化タンパク質であるエスピンをコードしています。エスピンは、突起の伸長や安定化を含む細胞骨格構築を制御し、それによって細胞表面の形態や機械感覚構造の形成に関与します。アクチン動態の調節および架橋を介して、エスピンは上皮の刷子縁の組織化や有毛細胞ステレオシリアの維持などのプロセスに影響を与えます。ESPN機能の変化は、聴覚生物学やアクチン駆動の構造異常に関連する感覚・細胞骨格表現型と関連付けられています。

Espin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるESPN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ESPN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ESPNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Espinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Espinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ESPN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Espinの機能に不可欠なESPNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ESPNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Espin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEspin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ESPN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Espin HDRプラスミド（h）および Espin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはESPNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のESPN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。