Plasmide CRISPR/Cas9 KO ErbB4/HER4 (m): sc-420220

Présentation

Erbb4 code pour le récepteur tyrosine kinase ErbB4/HER4, un membre de la famille EGFR/ErbB qui se lie aux neurégulines et à d’autres ligands de type EGF afin de réguler la signalisation cellule–cellule. Après dimérisation induite par le ligand, ErbB4 active des cascades en aval, notamment PI3K–AKT, RAS–RAF–MEK–ERK, JAK–STAT et PLCγ/PKC, orchestrant des programmes de prolifération, de survie, de différenciation et de migration. Dans les tissus murins, ErbB4 est particulièrement important pour le neurodéveloppement et la signalisation synaptique, ainsi que pour la biologie épithéliale et cardiaque, où il contribue à la mise en place de patrons induits par les facteurs de croissance et au maintien de l’homéostasie. Une signalisation ErbB4 dérégulée et des altérations des interactions entre voies ont été impliquées dans des réseaux de signalisation liés au cancer et dans des phénotypes neurologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des études de voies et de relations génotype–phénotype.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ErbB4/HER4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Erbb4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Erbb4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Erbb4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ErbB4/HER4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Erbb4 pour l'étude de la signalisation de ErbB4/HER4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Erbb4 essentiels à la fonction de ErbB4/HER4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Erbb4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ErbB4/HER4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ErbB4/HER4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Erbb4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ErbB4/HER4 plasmide HDR (m) et le ErbB4/HER4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Erbb4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Erbb4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.