Plasmide Double Nickase (h) Epidermis-type 12-LO: sc-410534-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Epidermis-type 12-LO correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Epidermis-type 12-LO Double Nickase (h) et le plasmide Epidermis-type 12-LO Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALOX12B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Epidermis-type 12-LO | sc-410534-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Epidermis-type 12-LO | sc-410534-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALOX12B code la 12‑lipoxygénase de type épidermique (12R‑LO), une dioxygénase à fer non hémique qui oxygène l’acide arachidonique estérifié présent dans les lipides épidermiques afin de générer des intermédiaires hydroperoxydes utilisés dans une signalisation lipidique spécialisée. Cette activité soutient la différenciation des kératinocytes et la formation de la barrière de perméabilité de la couche cornée via des voies coordonnées de remodelage lipidique impliquant des enzymes de traitement en aval appartenant aux réseaux de l’hépoxiline et d’oxylipines apparentées. La fonction d’ALOX12B est étroitement liée à l’assemblage de l’enveloppe cornée et à l’homéostasie épidermique, et sa perturbation génétique est associée à des troubles de la kératinisation et à des défauts de barrière. Par conséquent, ALOX12B est largement étudié dans des modèles de développement de l’épiderme, de biologie inflammatoire cutanée et de métabolisme des médiateurs lipidiques.
Epidermis-type 12-LO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALOX12B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALOX12B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALOX12B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALOX12B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.