Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419088

概要

Alox12b は、表皮型12-リポキシゲナーゼ（12-LO）をコードしている。これは非ヘム鉄依存性のジオキシゲナーゼで、エステル化された多価不飽和脂肪酸を酸化し、ヒドロペルオキシ脂質中間体を生成する。マウス表皮では、ALOX12B はアシルセラミドのプロセシングと角質層脂質バリアの形成を支えるリポキシゲナーゼ経路の一部として機能し、終末ケラチノサイト分化と角化（cornification）を協調的に制御する。12-LO 活性の変化は、表皮脂質恒常性、酸化脂質シグナル伝達、バリア完全性に影響を及ぼし、これらは魚鱗癬様表現型、皮膚炎、炎症性皮膚ストレスのモデルで一般的に研究される過程である。そのため、Alox12b は、上皮バリア機能および皮膚の免疫シグナル伝達に対する脂質代謝の寄与を解析するための有用な切り口となる。

Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAlox12b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Alox12b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Alox12bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Epidermis-type 12-LOタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Epidermis-type 12-LOシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Alox12b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Epidermis-type 12-LOの機能に不可欠なAlox12bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Alox12bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEpidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Alox12b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Epidermis-type 12-LO HDRプラスミド（m）および Epidermis-type 12-LO HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAlox12bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAlox12b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。