Plasmide CRISPR/Cas9 KO Epidermis-type 12-LO (m): sc-419088

Présentation

Alox12b code la 12‑lipoxygénase de type épidermique (12‑LO), une dioxygénase dépendante du fer non hémique qui oxyde des acides gras polyinsaturés estérifiés afin de générer des intermédiaires lipidiques hydroperoxydés. Dans l’épiderme murin, ALOX12B agit au sein de la voie des lipoxygénases qui soutient la maturation des acylcéramides et la formation de la barrière lipidique de la couche cornée, en coordonnant la différenciation terminale des kératinocytes et la cornification. Une activité 12‑LO altérée affecte l’homéostasie lipidique épidermique, la signalisation oxydative des lipides et l’intégrité de la barrière, des processus couramment étudiés dans des modèles de phénotypes de type ichtyose, de dermatite et de stress cutané inflammatoire. Ainsi, Alox12b constitue un point d’entrée utile pour disséquer les contributions du métabolisme lipidique à la fonction de barrière épithéliale et à la signalisation immunitaire cutanée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Epidermis-type 12-LO (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Alox12b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Alox12b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Alox12b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Epidermis-type 12-LO.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Alox12b pour l'étude de la signalisation de Epidermis-type 12-LO, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Alox12b essentiels à la fonction de Epidermis-type 12-LO
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Alox12b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Epidermis-type 12-LO plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Epidermis-type 12-LO plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Alox12b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Epidermis-type 12-LO plasmide HDR (m) et le Epidermis-type 12-LO (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Alox12b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Alox12b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.