Plásmido Doble Nickase (h) EphA4: sc-400729-NIC

EPHA4 codifica EphA4, una tirosina quinasa receptora de la familia Eph/ephrina que media señales dependientes del contacto celular, importantes para la guía axonal, la plasticidad sináptica y la formación de límites tisulares. Tras unirse a ligandos efrina, EphA4 desencadena señalización bidireccional que modula la remodelación del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración mediante vías que involucran GTPasas de la familia Rho, cascadas MAPK y señalización asociada a PI3K. En biología humana, la alteración de la señalización de EphA4 se ha asociado con conectividad neuronal desregulada y programas aberrantes de motilidad celular relevantes en contextos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, así como con fenotipos ligados a la invasión en modelos de cáncer. Estas características hacen de EPHA4 un nodo útil para estudiar el crosstalk entre tirosinas quinasas receptoras, la dinámica de la señalización dependiente de ligando y los mecanismos de comunicación célula–célula.

EphA4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPHA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPHA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPHA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPHA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.