ENX-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-417028-LAC

EZH2 kodiert ENX-1, die katalytische Untereinheit des Polycomb-Repressionskomplexes 2 (PRC2), der Histon H3 an Lysin 27 (H3K27me3) trimethyliert, um transkriptionelle Repression und Chromatinkompaktion zu etablieren. Durch epigenetisches Silencing von Genen, die mit Zelllinie und Zellzyklus assoziiert sind, reguliert ENX-1 Entwicklung, Stammzellidentität, Differenzierung und die Aufrechterhaltung des zellulären Gedächtnisses. Die EZH2-Aktivität ist in die Polycomb/Trithorax-Regulation eingebunden, interagiert mit Chromatin-Remodeling und steht in Wechselwirkung mit DNA-Methylierung sowie Signalwegen, die Transkriptionsprogramme prägen. Eine fehlregulierte EZH2-Expression oder -Funktion wird aufgrund ihres weitreichenden Einflusses auf Genexpressionszustände häufig in der Krebsbiologie, der Immunregulation und neuroentwicklungsbezogenen Prozessen untersucht.

ENX-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EZH2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ENX-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EZH2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ENX-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EZH2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.