Endoglin/CD105 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400599-ACT

ENG kodiert Endoglin (CD105), ein homodimeres transmembranes Glykoprotein, das als Korezeptor innerhalb des Rezeptorkomplexes der TGF-β-Superfamilie fungiert. Es moduliert die SMAD-abhängige Signalübertragung nach Aktivierung durch Liganden wie TGF-β und BMPs und beeinflusst dadurch während der Angiogenese und vaskulären Homöostase die Proliferation und Migration von Endothelzellen sowie den Umbau der extrazellulären Matrix. Endoglin wird stark in aktiviertem Endothel und in bestimmten stromalen Kompartimenten exprimiert und ist damit mit Prozessen wie Gefäßentwicklung, entzündungsassoziiertem Remodeling und hypoxieabhängiger Signalgebung verknüpft. Eine dysregulierte ENG-Expression oder -Funktion ist an der Biologie vaskulärer Malformationen und an abnormer Neovaskularisation beteiligt, wie sie in verschiedenen Krankheitskontexten beobachtet wird.

Endoglin/CD105 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ENG-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Endoglin/CD105 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ENG-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ENG-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Endoglin/CD105-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ENG-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Endoglin/CD105-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Endoglin/CD105-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ENG-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.