Plasmide CRISPR d'Activation (h) ELOVL2: sc-404998-ACT

ELOVL2 code une élongase d’acides gras localisée dans le réticulum endoplasmique, qui catalyse des étapes d’élongation limitantes dans la synthèse d’acides gras polyinsaturés à très longue chaîne, notamment des précurseurs de l’acide docosahexaénoïque (DHA). En allongeant des substrats C20–C22 en produits à chaîne plus longue, ELOVL2 influence la composition lipidique des membranes, la disponibilité des médiateurs lipidiques et la bioénergétique cellulaire via des voies interconnectées du métabolisme des acides gras et du remodelage des phospholipides. Une expression ou une activité altérée d’ELOVL2 a été associée à des modifications de l’homéostasie lipidique rétinienne et neurale, de la signalisation inflammatoire et de la régulation épigénétique liée à l’âge. Ces propriétés font d’ELOVL2 une cible utile pour étudier le contrôle métabolique de la dynamique membranaire et la signalisation dépendante des lipides dans les cellules humaines.

ELOVL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELOVL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ELOVL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELOVL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELOVL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ELOVL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELOVL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ELOVL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ELOVL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ELOVL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.