Plasmide CRISPR d'Activation (h) Elongin A3: sc-418260-ACT

TCEB3C code pour l’Elongin A3, un membre de la famille Elongin A impliqué dans le contrôle de la transcription par l’ARN polymérase II et dans la modulation de l’élongation transcriptionnelle. Par ses interactions avec les complexes d’Elongin et des assemblages protéiques associés à la transcription, l’Elongin A3 est lié à la régulation de programmes d’expression génique qui coordonnent les transitions d’état cellulaire, les réponses adaptatives au stress et les processus liés à la protéostasie. Des altérations d’expression ou de contexte de voie impliquant le contrôle de l’élongation et la régulation ubiquitine‑protéasome sont fréquemment étudiées en cancérologie et dans d’autres troubles caractérisés par une dérégulation transcriptionnelle, faisant de TCEB3C un nœud utile pour des études mécanistiques. La fonction de l’Elongin A3 humain est donc pertinente pour examiner comment la production transcriptionnelle est ajustée au sein des voies de signalisation et selon les états de la chromatine.

Elongin A3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TCEB3C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Elongin A3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TCEB3C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TCEB3C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Elongin A3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TCEB3C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Elongin A3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Elongin A3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TCEB3C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.