Plasmide CRISPR d'Activation (h) ELL: sc-404799-ACT

ELL humain code un facteur d’élongation de l’ARN polymérase II qui augmente la processivité de la transcription et contribue à coordonner une élongation productive lors de l’expression génique. ELL participe à des programmes de contrôle transcriptionnel qui influencent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses cellulaires au stress, via la régulation de la pause proximale au promoteur et de points de contrôle associés à l’élongation. La dérégulation de l’élongation transcriptionnelle dépendante d’ELL est liée à une expression altérée des programmes de croissance et de lignée, et ELL a été impliqué dans des réseaux transcriptionnels oncogéniques par des événements de fusion récurrents et un recrutement aberrant de cofacteurs. En conséquence, ELL est fréquemment étudié pour son rôle dans la fidélité de la transcription, la régulation associée à la chromatine et le remodelage de l’expression génique pertinent pour les maladies.

ELL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ELL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ELL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ELL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ELL dans les cellules tumorales présentant une expression de ELL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.