Plasmide CRISPR d'Activation (h) Egr-4: sc-403343-ACT

EGR4 code pour Egr-4, un facteur de transcription à doigt de zinc de type « gène de réponse immédiate », qui relie des signaux extracellulaires à des changements rapides des programmes d’expression génique. Il est induit en aval de MAPK/ERK et d’autres cascades de signalisation dépendantes de l’activité, où il module des réseaux transcriptionnels impliqués dans les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et des réponses au stress spécifiques du contexte. Egr-4 participe à des circuits de régulation contrôlant la biologie du système nerveux et du système reproducteur, et des profils d’expression altérés ont été rapportés dans des études sur la biologie des tumeurs et les processus du neurodéveloppement. En tant que régulateur transcriptionnel, EGR4 constitue un nœud utile pour explorer des réseaux de gènes sensibles aux stimuli et le remodelage des voies en aval.

Egr-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EGR4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Egr-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EGR4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EGR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Egr-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EGR4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Egr-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Egr-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de EGR4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.