Plasmide Double Nickase (h) EDG-1/S1P1/S1PR1: sc-400413-NIC

S1PR1 (EDG-1/S1P1) code un récepteur couplé aux protéines G de la sphingosine-1-phosphate, qui régule l’intégrité de la barrière endothéliale, la maturation vasculaire et le trafic des cellules immunitaires. L’activation du récepteur déclenche une signalisation dépendante de Gi, avec en aval les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et celles des GTPases de la famille Rho, qui modulent la dynamique du cytosquelette, l’organisation des jonctions d’adhérence et les réponses chimiotactiques. Dans les contextes hématopoïétique et vasculaire, S1PR1 contribue à la sortie des lymphocytes, au bourgeonnement angiogénique et au tonus inflammatoire via son intégration aux réseaux de cytokines et de chimiokines. Une signalisation S1PR1 dysrégulée a été associée à des altérations de la perméabilité vasculaire et de l’homéostasie immunitaire dans des études sur l’inflammation, la biologie cardiovasculaire et le microenvironnement tumoral, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur la signalisation des récepteurs.

EDG-1/S1P1/S1PR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus S1PR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de S1PR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de S1PR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de S1PR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.