EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400413-ACT

S1PR1 (EDG-1/S1P1) ist ein auf Sphingosin-1-phosphat (S1P) ansprechender G‑Protein‑gekoppelter Rezeptor, der extrazelluläre Lipidsignale integriert, um die Integrität der endothelialen Barriere, die Gefäßreifung und das Trafficking von Immunzellen zu regulieren. Nach Ligandenbindung koppelt S1PR1 vorwiegend an Gi und koordiniert dadurch PI3K‑AKT‑, MAPK/ERK‑ sowie Rac/Rho‑Familien‑Signale, die Zytoskelettdynamik, die Stabilität von Adhärens‑Junctions und chemotaktische Antworten prägen. Dieser Rezeptor ist zentral für die Angiogenese und den Lymphozyten‑Austritt und verknüpft S1P‑Gradienten mit der koordinierten Bewegung und Positionierung von Zellen über vaskuläre und lymphoide Kompartimente hinweg. Eine fehlregulierte S1PR1‑Signalgebung wurde mit entzündlichen Signalnetzwerken, vaskulärer Dysfunktion und der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zu Immunität, Permeabilität und metastaseassoziierten Prozessen stützt.

EDG-1/S1P1/S1PR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S1PR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EDG-1/S1P1/S1PR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S1PR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S1PR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EDG-1/S1P1/S1PR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S1PR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EDG-1/S1P1/S1PR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EDG-1/S1P1/S1PR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S1PR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.