EB1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401367-ACT

ヒトMAPRE1はエンド結合タンパク質1（EB1）をコードしており、微小管プラス端に追随する因子（＋TIP）の中核として、微小管ダイナミクスを皮質での捕捉、有糸分裂紡錘体の組み立て、染色体分配と協調させます。EB1はAPCなどの＋TIPタンパク質と相互作用して、微小管伸長、細胞極性、細胞内輸送を調節し、細胞骨格の再構築を細胞周期制御につなげます。MAPRE1/EB1の機能異常は、有糸分裂の忠実性の変化、異数性、浸潤性の細胞挙動と関連づけられており、増殖・遊走表現型の基盤となる経路の研究において重要です。また、微小管依存的プロセスにおける中心的役割は、中心体機能や紡錘体チェックポイント制御に関する機序研究も支持します。

EB1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPRE1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EB1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPRE1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPRE1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPRE1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPRE1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。