E4BP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421874

Panoramica

Nfil3 codifica il fattore di trascrizione bZIP (basic leucine zipper) E4BP4 (NFIL3), un regolatore di programmi di espressione genica che integrano input circadiani con segnali immunitari e metabolici. Nel topo, E4BP4 modella la differenziazione e la funzione effettrice delle cellule immunitarie innate e adattative, inclusi lo sviluppo delle cellule natural killer e reti trascrizionali dipendenti da citochine. Partecipa a vie di segnalazione collegate a JAK/STAT e all’infiammazione e modula gli output trascrizionali legati alla sopravvivenza cellulare e alla risposta allo stress. La deregolazione dei programmi associati a NFIL3 è rilevante negli studi su squilibri immunitari, infiammazione e immunologia tumorale, in cui un controllo trascrizionale alterato può influenzare l’omeostasi tissutale e i fenotipi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nfil3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nfil3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nfil3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina E4BP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nfil3 per lo studio della segnalazione di E4BP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nfil3 critici per la funzione di E4BP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nfil3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal E4BP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal E4BP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nfil3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal E4BP4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR E4BP4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nfil3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nfil3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.