Plásmido Doble Nickase (h) dystrophin: sc-400657-NIC

DMD codifica la distrofina, una gran proteína del citoesqueleto que ancla la red de actina al complejo distrofina–glicoproteínas en el sarcolema, estabilizando las fibras musculares durante la contracción. A través de su función de enlazar el citoesqueleto intracelular con la matriz extracelular, la distrofina contribuye a la integridad de la membrana, la mecanotransducción y la organización de los costámeros en el músculo esquelético y cardíaco. La pérdida o reducción de distrofina altera estas interacciones estructurales y de señalización, modificando la homeostasis del calcio, la señalización inflamatoria y los programas de regeneración muscular. La disfunción de DMD está fuertemente asociada con las distrofias musculares ligadas al cromosoma X, lo que convierte a la distrofina en un nodo central para estudiar los mecanismos de degeneración muscular y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos humanos.

dystrophin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DMD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DMD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DMD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DMD alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.