Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411947

概要

DNAI1は、運動性線毛および鞭毛の拍動を駆動する外側ダイニンアームにおいて、その組み立てと力の伝達に必須な軸糸ダイニン構成要素であるダイニン中間鎖1（Dynein intermediate chain 1）をコードします。ATP駆動のダイニンモーター活性を微小管二重小管に結び付けることで、軸糸型ダイニンIC1は、協調的な線毛波形の形成や粘液線毛クリアランス過程に寄与します。DNAI1の機能は、線毛の生合成、軸糸構造の組織化、ならびに運動性線毛構造の維持に必要な鞭毛内輸送（IFT）依存的な機構を制御する経路と交差しています。DNAI1の破綻は原発性線毛運動不全症（PCD）と関連しており、軸糸ダイニンの完全性の変化が線毛運動の障害、ひいては発生および呼吸器系の表現型へとつながることが示唆されます。

Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNAI1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNAI1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNAI1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dynein IC1, axonemalタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dynein IC1, axonemalシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNAI1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dynein IC1, axonemalの機能に不可欠なDNAI1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNAI1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNAI1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dynein IC1, axonemal HDRプラスミド（h）および Dynein IC1, axonemal HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNAI1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNAI1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。