Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400571-ACT

DVL2 codifica a Dishevelled 2 (Dvl-2), uma proteína citoplasmática de ancoragem (scaffold) que acopla os receptores Frizzled à sinalização Wnt a jusante. A Dvl-2 coordena tanto programas transcricionais canônicos dependentes de β-catenina quanto vias não canônicas de polaridade celular planar e Wnt/Ca²⁺, integrando sinais por meio de seus domínios DIX, PDZ e DEP. Por meio dessas redes, DVL2 influencia o padrão embrionário, a polaridade celular, a migração e a remodelação do citoesqueleto. A atividade aberrante de DVL2 e a desregulação da via Wnt são frequentemente investigadas em modelos de sinalização oncogênica, distúrbios do desenvolvimento e homeostase tecidual.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DVL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DVL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DVL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DVL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 em células tumorais com expressão de DVL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.