Doublecortin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400033-NIC

DCXは、微小管結合タンパク質であるダブルコルチン（Doublecortin）をコードしており、微小管に結合してこれを安定化することで、脳発生期における神経細胞移動、神経突起の伸長、大脳皮質の層構造形成を制御します。ダブルコルチンは、細胞骨格のリモデリングと中心体—核カップリングを協調させ、細胞極性や指向性のある運動を形作る微小管ダイナミクスと統合的に機能します。DCXの機能が障害されると放射状移動や神経細胞の位置決めが乱れ、病的バリアントはX連鎖性滑脳症や皮質下帯状異所性灰白質（サブコルチカル・バンド・ヘテロトピア）などの神経発達性奇形と関連します。未熟ニューロンにおけるDCXのマーカーおよび機能調節因子として、神経新生、細胞骨格制御、発達期の回路形成の機序を研究するために広く用いられています。

Doublecortin/DCX ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DCX 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DCX内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DCXの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DCXが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。