DOCK 180 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401387-ACT

ヒトDOCK1（DOCK180）は、RacファミリーGTPアーゼを活性化する非典型的なグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であり、アクチン細胞骨格の再構築、細胞接着、ならびに方向性をもった遊走を協調的に制御します。インテグリン、受容体型チロシンキナーゼ、ケモカイン受容体の下流にあるシグナル伝達ノードを介して、DOCK180はラメリポディア形成、マクロピノサイトーシス、アポトーシス細胞の貪食といった過程を支えます。DOCK1依存的なRacシグナルは、上皮間葉転換（EMT）、浸潤に関連する運動プログラム、先天免疫細胞のトラフィッキングを制御する経路とも連携します。DOCK1の活性や発現の異常は炎症性表現型や腫瘍細胞の播種に関わる挙動と関連づけられており、がん生物学および免疫学における機構解析研究の標的として有用です。

DOCK 180 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DOCK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DOCK 180 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DOCK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDOCK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DOCK 180の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDOCK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDOCK 180依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDOCK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDOCK 180経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。