Plásmido Doble Nickase (m) DNA-PK_CS: sc-422405-NIC

Prkdc codifica la subunidad catalítica de la proteína cinasa dependiente de ADN, DNA-PKCS, un regulador central de la reparación de roturas de doble cadena del ADN mediante la vía de unión de extremos no homólogos (NHEJ). DNA-PKCS forma una holoenzima activa con Ku70/Ku80 para coordinar el reconocimiento de los extremos, la sinapsis y el procesamiento de los extremos, y participa en la recombinación V(D)J y en la recombinación de cambio de clase en linfocitos en desarrollo. Como componente central de la respuesta al daño del ADN, DNA-PKCS influye en la señalización de los puntos de control del ciclo celular, la estabilidad del genoma y la sensibilidad celular al estrés genotóxico. La alteración de la función de PRKDC se utiliza con frecuencia para modelar defectos en NHEJ, fenotipos de inestabilidad cromosómica y mecanismos que subyacen a vulnerabilidades de reparación del ADN relevantes para la inmunodeficiencia y el cáncer en sistemas de ratón.

DNA-PKCS El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Prkdc en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Prkdc. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Prkdc. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Prkdc alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.