DMRT2 Double Nickase Plasmid (m): sc-432587-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DMRT2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DMRT2 Double-Nickase-Plasmid (m) und DMRT2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dmrt2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DMRT2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DMRT2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dmrt2 kodiert DMRT2, einen DM-Domänen-Transkriptionsfaktor, der embryonale Musterbildungsprogramme reguliert – einschließlich der Somitogenese und der Entwicklung des axialen Skeletts –, indem er linien-/zelltypspezifische transkriptionelle Netzwerke koordiniert. In der Maus trägt DMRT2 zur Polarität der Somiten sowie zu Links-rechts-Asymmetriesignalen bei, die während der frühen Entwicklung die muskuloskelettale Organisation prägen. Seine Aktivität greift in Entwicklungs-Signalwege ein, die die Differenzierung des Mesoderms und das Timing morphogenetischer Prozesse steuern, was ihn zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle der Gewebespezifizierung macht. Eine fehlregulierte Dmrt2-Funktion wurde in Modellsystemen mit angeborenen Entwicklungsanomalien in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zu genregulatorischen Schaltkreisen unterstreicht, die der Morphogenese zugrunde liegen.
DMRT2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dmrt2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dmrt2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dmrt2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dmrt2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.