Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DHFR Double Nickase Plasmid (h): sc-416991-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DHFRL1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DHFRL1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DHFRL1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DHFR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DHFR Double Nickase Plasmid (h) | sc-416991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHFRL1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes DHFR2 kodiert die Dihydrofolat-Reduktase (DHFR), ein NADPH-abhängiges Enzym, das die Reduktion von Dihydrofolat zu Tetrahydrofolat katalysiert und damit den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel aufrechterhält, der für die de-novo-Biosynthese von Thymidylat und Purinen erforderlich ist. Über seine Rolle im Folatzyklus unterstützt DHFR die DNA-Replikation und -Reparatur, das Fortschreiten des Zellzyklus sowie die zelluläre Methylierungskapazität durch die Kopplung an den Methionin-/S-Adenosylmethionin-Stoffwechsel. Eine Störung der DHFR-Aktivität beeinflusst das Gleichgewicht der Nukleotidpools und die Genomstabilität – Prozesse, die häufig im Kontext von proliferativem Stress und metabolischer Umprogrammierung untersucht werden. Die DHFR-Biologie wird daher breit genutzt, um folatabhängige biosynthetische Wege sowie zelluläre Reaktionen auf Nukleotidverarmung und Replikationsstress zu untersuchen.
DHFRL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DHFR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DHFR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DHFR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DHFR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.