DHCR7 Double Nickase Plasmid (m): sc-419997-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DHCR7 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DHCR7 Double-Nickase-Plasmid (m) und DHCR7 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dhcr7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DHCR7 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHCR7 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dhcr7 kodiert die 7-Dehydrocholesterin-Reduktase (DHCR7), ein Enzym der endoplasmatischen Retikulum-Membran, das in der Kandutsch–Russell-Verzweigung des Cholesterin-Biosynthesewegs die abschließende Reduktion von 7-Dehydrocholesterin zu Cholesterin katalysiert. Durch die Steuerung der Cholesterinverfügbarkeit beeinflusst DHCR7 die Zusammensetzung von Membran-Mikrodomänen, die Steroidogenese sowie lipidabhängige Signalprozesse, die die zelluläre Proliferation und Differenzierung prägen. Eine Störung der DHCR7-Aktivität bringt die Sterolhomöostase aus dem Gleichgewicht und führt zur Anreicherung von Vorläufersterolen; dadurch verändern sich die Empfindlichkeit gegenüber oxidativem Stress und entwicklungsrelevante Signalnetzwerke. In Mausmodellen wird Dhcr7 häufig genutzt, um zu untersuchen, wie ein Ungleichgewicht im Cholesterinweg neuroentwicklungsbezogene, metabolische und membrantransportbezogene Phänotypen beeinflusst, die für die Biologie sterolassoziierter genetischer Erkrankungen relevant sind.
DHCR7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dhcr7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dhcr7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dhcr7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dhcr7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.