Plásmido Doble Nickase (h) Desmuslin: sc-409241-NIC

SYNM codifica la desmuslina, una proteína asociada a los filamentos intermedios enriquecida en el músculo estriado, donde ayuda a organizar la red del citoesqueleto y a mantener la integridad estructural en los discos Z y los costámeros. La desmuslina participa en vías que regulan el anclaje del citoesqueleto, la mecanotransducción y la transmisión de fuerza al conectar los sistemas de filamentos con complejos asociados a la membrana. La alteración de SYNM se ha asociado con desorganización miofibrilar y cambios en la estabilidad de las fibras musculares, lo que la hace relevante para estudiar respuestas al estrés dependientes del citoesqueleto. Como componente tipo andamiaje de la arquitectura muscular, la desmuslina se examina con frecuencia en modelos de cardiomiopatía y miopatía esquelética para comprender cómo las redes de filamentos intermedios preservan la resiliencia celular.

Desmuslin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SYNM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SYNM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SYNM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SYNM alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.