desmoplakin I/II Plasmide Double Nickase (h): sc-400818-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- desmoplakin I/II Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il desmoplakin I/II Double Nickase Plasmid (h) e il desmoplakin I/II Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DSP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: desmoplakin I/II Antibody (A-1): sc-390975
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
desmoplakin I/II Plasmide Double Nickase (h) | sc-400818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
desmoplakin I/II Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DSP codifica la desmoplachina I/II, un componente fondamentale della famiglia delle plakine nei desmosomi, che ancora i filamenti intermedi alle placche desmosomiali per mantenere l’integrità meccanica negli epiteli e nel tessuto cardiaco. Collegando le reti di cheratina o desmina ai complessi desmogleina/desmocollina–plakoglobina–plakofilina, la desmoplachina sostiene la stabilità delle giunzioni, l’organizzazione del citoscheletro e le vie di meccanotrasduzione che coordinano la resilienza tissutale. L’alterazione di DSP compromette l’assemblaggio dei desmosomi e l’ancoraggio dei filamenti intermedi, causando difetti di adesione cellula–cellula e una segnalazione dello stress modificata. La disfunzione di DSP è associata a patologie ereditarie e acquisite caratterizzate da fragilità cutanea e fenotipi di cardiomiopatia, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio della biologia delle giunzioni e dei meccanismi che preservano l’integrità dei tessuti.
desmoplakin I/II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DSP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DSP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DSP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DSP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.