DDIT3/CHOP/GADD153 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400051-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DDIT3/CHOP/GADD153O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase DDIT3/CHOP/GADD153 (h) e o Plasmídeo Double Nickase DDIT3/CHOP/GADD153 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para DDIT3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DDIT3/GADD153/CHOP Anticorpo (B-3): sc-7351
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DDIT3/CHOP/GADD153 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400051-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDIT3/CHOP/GADD153 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400051-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDIT3 codifica o fator de transcrição CHOP (GADD153), uma proteína bZIP induzível por estresse que forma heterodímeros com membros da família C/EBP para reprogramar a expressão gênica durante o estresse celular. CHOP é um efetor central da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), integrando a sinalização PERK–eIF2α–ATF4 para regular apoptose, controle redox e proteostase sob estresse do retículo endoplasmático. Além do estresse de RE, DDIT3 participa de vias da resposta integrada ao estresse ligadas à privação de nutrientes, estresse oxidativo e sinais inflamatórios, influenciando decisões de destino celular e programas de diferenciação. A atividade desregulada de CHOP está implicada em disfunção metabólica, modelos de neurodegeneração, lesão tecidual inflamatória e contextos oncogênicos, incluindo a fusão FUS-DDIT3 associada ao lipossarcoma mixoide, tornando DDIT3 um nó-chave para estudos mecanísticos de redes transcricionais adaptativas ao estresse.
DDIT3/CHOP/GADD153 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DDIT3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DDIT3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DDIT3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DDIT3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.