DAP12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400916-ACT

TYROBPは、DNAX-activating protein 12（DAP12）をコードする。DAP12はITAMモチーフを有する膜貫通型アダプター分子で、骨髄系細胞およびリンパ系細胞に発現する活性化受容体を下流のシグナル伝達へと結び付ける。DAP12はTREM2、SIRPβ1、ならびに一部のNK細胞受容体などと複合体を形成し、SYK/ZAP70のリン酸化を促進するとともに、PI3K、MAPK、NF-κB経路を活性化する。これらの経路は、貪食、サイトカイン産生、酸化バースト、細胞生存の制御に関与する。ミクログリアやマクロファージでは、TYROBP依存的シグナルが自然免疫の活性化、脂質代謝（脂質処理）、細胞残骸の除去を形作り、神経炎症過程や免疫調節異常との関連が示されている。TYROBP/DAP12シグナルの変調は、炎症性および神経変性に関連する表現型と関連付けられており、ヒト免疫細胞における受容体—アダプター型シグナル伝達ネットワークを研究する上で有用な標的となる。

DAP12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TYROBPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DAP12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TYROBP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTYROBP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DAP12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTYROBP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDAP12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTYROBP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDAP12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。