Plásmido CRISPR de Activación (h) D54: sc-407162-ACT

El TPD52L2 humano codifica D54, un miembro de la familia de proteínas tumorales tipo D52 implicada en el tráfico vesicular, la dinámica de membranas y la regulación de programas de proliferación y supervivencia celular. D54 se ha relacionado con procesos secretores y endocíticos que pueden influir en el reciclaje de receptores y en las salidas de señalización intracelular, conectando con vías que coordinan el crecimiento y las respuestas al estrés. Se han descrito alteraciones en la expresión de TPD52L2 en múltiples contextos de cáncer y enfermedades proliferativas, lo que respalda su utilidad como herramienta molecular para estudiar transiciones desreguladas del estado celular. En investigación básica, D54 se utiliza para analizar mecanismos de transporte intracelular acoplados a la señalización oncogénica y a la adaptación metabólica.

D54 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TPD52L2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

D54 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TPD52L2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TPD52L2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de D54. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TPD52L2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de D54 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía D54 en células tumorales con expresión de TPD52L2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.